全自动酶标仪是生物化学、免疫学等领域中常用的检测设备,主要用于酶联免疫吸附试验(ELISA)、细胞活性检测、蛋白浓度测定等。凭借光电技术与自动化控制的协同,实现了从样本处理到数据分析的闭环管理,不仅提升了实验效率与精度,还通过模块化设计拓展了应用场景。
全自动酶标仪的核心优点:
1.高精度与稳定性:配备高灵敏度光电检测器和精密光学系统,即使在低浓度样本检测中也能保持误差小。例如,ELISA试验中可稳定检测pg/mL级别的细胞因子。
2.高效自动化与通量提升:全自动化流程缩短实验周期。以96孔板为例,单次检测仅需数秒,较传统手工操作效率提升数十倍。多通道并行检测设计进一步优化了时间成本。
3.多功能检测能力:支持吸光度、荧光、化学发光等多种检测模式,覆盖从核酸蛋白定量到细胞活性分析的多样化需求。灵活性与可扩展性使其适应复杂实验场景。
4.智能化数据处理:内置算法可自动拟合标准曲线、计算浓度值,并生成可视化报告。用户还可通过升级软件或添加模块扩展功能,满足动态研究需求。
全自动酶标仪实验流程:
1.实验前准备
- 试剂与样本处理:
- 提前30分钟从冰箱取出所有试剂(包括包被板、酶标抗体、底物、终止液等),平衡至室温(避免温差导致反应不均)。
- 样本需离心(2000-3000rpm,5-10分钟)去除气泡和杂质,避免加样时堵塞针头或干扰读数。
- 按实验设计稀释标准品(如梯度稀释),并标记好样本位置(建议设置空白孔、对照孔、样本孔)。
- 仪器检查:
- 开机前确认电源稳定,检查酶标仪的滤光片(或单色器)是否匹配实验需求(如ELISA常用450nm/630nm双波长);
- 查看微孔板托架是否清洁、无变形,避免卡板或定位偏差;
- 若仪器带自动洗板功能,需提前检查洗头是否堵塞(可用去离子水冲洗)。
2.加样与孵育
- 加样:使用多通道移液器或全自动加样系统向微孔板中加入样本、标准品、对照品(注意:避免枪头触碰孔壁,防止交叉污染;加样后轻震板条1-2次,使液体均匀覆盖孔底)。
- 孵育:根据实验要求(如ELISA的抗原抗体结合)将微孔板放入恒温孵育箱(通常37℃),时间严格控制(如30-60分钟),避免过短(反应不充分)或过长(非特异性结合增加)。
3.洗板(关键步骤)
- 孵育后需用洗板机清洗未结合的成分(如未结合的抗体或抗原)。
- 参数设置:洗板次数(通常3-5次)、注液量(每孔200-300μL)、浸泡时间(10-30秒),确保残留液体被吸走(可在吸水纸上拍干)。
- 注意:洗板液需新鲜配制(如PBST缓冲液),避免盐析或pH变化影响结果;若手工洗板,需保持各孔冲洗力度一致。
4.显色与终止
- 加底物:避光条件下加入酶底物(如TMB或OPD),立即启动计时(显色反应对时间敏感)。
- 终止反应:达到预设时间后,快速加入终止液(如2M HSO),轻轻混匀使反应终止(避免气泡产生)。
5.上机检测
- 参数设置:在酶标仪软件中选择对应检测模式(如“终点法”“动力学法”),设置波长(如TMB显色测450nm,参比波长630nm消除板底干扰)。
- 校准:空白孔(仅含底物和终止液)调零,消除背景吸收。
- 读板:将微孔板放入仪器,确认板位正确(避免偏移),启动检测并保存数据。
6.数据处理与分析
- 导出原始吸光度值(OD值),利用标准曲线(如Logit-Log拟合)计算样本浓度;
- 评估实验有效性(如空白孔OD值应<0.1,标准品R>0.99为合格);
- 记录异常结果(如边缘效应导致的高/低值),必要时重复检测。